nature.com സന്ദർശിച്ചതിന് നന്ദി. നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ബ്രൗസർ പതിപ്പിന് പരിമിതമായ CSS പിന്തുണ മാത്രമേ ഉള്ളൂ. മികച്ച അനുഭവത്തിനായി, ഏറ്റവും പുതിയ ബ്രൗസർ പതിപ്പ് ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു (അല്ലെങ്കിൽ ഇന്റർനെറ്റ് എക്സ്പ്ലോററിൽ അനുയോജ്യതാ മോഡ് ഓഫാക്കുക). കൂടാതെ, തുടർച്ചയായ പിന്തുണ ഉറപ്പാക്കാൻ, ഈ സൈറ്റിൽ സ്റ്റൈലുകളോ ജാവാസ്ക്രിപ്റ്റോ ഉൾപ്പെടുത്തില്ല.
ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന് (H2S) മനുഷ്യശരീരത്തിൽ ഒന്നിലധികം ശാരീരികവും രോഗപരവുമായ ഫലങ്ങൾ ഉണ്ട്. ജൈവ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ H2S ന്റെ ഫലങ്ങൾ വിലയിരുത്തുന്നതിനുള്ള ഒരു ഫാർമക്കോളജിക്കൽ ഉപകരണമായി സോഡിയം ഹൈഡ്രോസൾഫൈഡ് (NaHS) വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. NaHS ലായനികളിൽ നിന്ന് H2S നഷ്ടപ്പെടാൻ കുറച്ച് മിനിറ്റുകൾ മാത്രമേ എടുക്കൂവെങ്കിലും, ചില മൃഗ പഠനങ്ങളിൽ കുടിവെള്ളത്തിൽ H2S ന്റെ ദാതാവ് സംയുക്തങ്ങളായി NaHS ലായനികൾ ഉപയോഗിച്ചിട്ടുണ്ട്. ചില എഴുത്തുകാർ നിർദ്ദേശിച്ചതുപോലെ, എലി/എലി കുപ്പികളിൽ തയ്യാറാക്കിയ 30 μM NaHS സാന്ദ്രതയുള്ള കുടിവെള്ളം കുറഞ്ഞത് 12-24 മണിക്കൂറെങ്കിലും സ്ഥിരതയോടെ തുടരുമോ എന്ന് ഈ പഠനം അന്വേഷിച്ചു. കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS (30 μM) ലായനി തയ്യാറാക്കി ഉടൻ തന്നെ എലി/എലി വാട്ടർ ബോട്ടിലുകളിലേക്ക് ഒഴിക്കുക. മെത്തിലീൻ നീല രീതി ഉപയോഗിച്ച് സൾഫൈഡ് ഉള്ളടക്കം അളക്കുന്നതിന് 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 24 മണിക്കൂറുകളിൽ വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ അഗ്രഭാഗത്തുനിന്നും ഉള്ളിൽ നിന്നും സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ചു. കൂടാതെ, ആൺ എലികൾക്കും പെൺ എലികൾക്കും രണ്ടാഴ്ചത്തേക്ക് NaHS (30 μM) കുത്തിവച്ചു, ആദ്യ ആഴ്ചയിലും രണ്ടാമത്തെ ആഴ്ചയുടെ അവസാനത്തിലും സെറം സൾഫൈഡ് സാന്ദ്രത മറ്റെല്ലാ ദിവസവും അളന്നു. വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ അഗ്രത്തിൽ നിന്ന് ലഭിച്ച സാമ്പിളിലെ NaHS ലായനി അസ്ഥിരമായിരുന്നു; 12, 24 മണിക്കൂറുകൾക്ക് ശേഷം ഇത് യഥാക്രമം 72% ഉം 75% ഉം കുറഞ്ഞു. വാട്ടർ ബോട്ടിലുകളുടെ ഉള്ളിൽ നിന്ന് ലഭിച്ച സാമ്പിളുകളിൽ, 2 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ NaHS ലെ കുറവ് കാര്യമായി ഉണ്ടായിരുന്നില്ല; എന്നിരുന്നാലും, 12, 24 മണിക്കൂറുകൾക്ക് ശേഷം ഇത് യഥാക്രമം 47% ഉം 72% ഉം കുറഞ്ഞു. NaHS കുത്തിവയ്പ്പ് ആൺ എലികളുടെയും പെൺ എലികളുടെയും സെറം സൾഫൈഡ് നിലയെ ബാധിച്ചില്ല. ഉപസംഹാരമായി, കുടിവെള്ളത്തിൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കിയ NaHS ലായനികൾ H2S ദാനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കരുത്, കാരണം ലായനി അസ്ഥിരമാണ്. ഈ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ വഴി മൃഗങ്ങളെ ക്രമരഹിതവും പ്രതീക്ഷിച്ചതിലും ചെറിയതുമായ NaHS ലേക്ക് നയിക്കും.
1700 മുതൽ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് (H2S) ഒരു വിഷവസ്തുവായി ഉപയോഗിച്ചുവരുന്നു; എന്നിരുന്നാലും, ഒരു എൻഡോജെനസ് ബയോസിഗ്നലിംഗ് തന്മാത്ര എന്ന നിലയിൽ അതിന്റെ സാധ്യമായ പങ്ക് 1996-ൽ അബെയും കിമുറയും വിവരിച്ചു. കഴിഞ്ഞ മൂന്ന് പതിറ്റാണ്ടുകളായി, വിവിധ മനുഷ്യ വ്യവസ്ഥകളിലെ H2S-ന്റെ നിരവധി പ്രവർത്തനങ്ങൾ വ്യക്തമാക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്, ഇത് ചില രോഗങ്ങളുടെ ചികിത്സയിലോ മാനേജ്മെന്റിലോ H2S ദാതാവിന്റെ തന്മാത്രകൾക്ക് ക്ലിനിക്കൽ പ്രയോഗങ്ങൾ ഉണ്ടായിരിക്കാമെന്ന് മനസ്സിലാക്കുന്നതിലേക്ക് നയിച്ചു; സമീപകാല അവലോകനത്തിനായി ചിരിനോ തുടങ്ങിയവർ കാണുക.
സോഡിയം ഹൈഡ്രോസൾഫൈഡ് (NaHS) പല കോശ സംസ്ക്കരണ പഠനങ്ങളിലും മൃഗ പഠനങ്ങളിലും H2S ന്റെ ഫലങ്ങൾ വിലയിരുത്തുന്നതിനുള്ള ഒരു ഫാർമക്കോളജിക്കൽ ഉപകരണമായി വ്യാപകമായി ഉപയോഗിച്ചുവരുന്നു5,6,7,8. എന്നിരുന്നാലും, NaHS ഒരു ഉത്തമ H2S ദാതാവല്ല, കാരണം ഇത് വേഗത്തിൽ H2S/HS- ലായനിയിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെടുന്നു, പോളിസൾഫൈഡുകളാൽ എളുപ്പത്തിൽ മലിനീകരിക്കപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ എളുപ്പത്തിൽ ഓക്സീകരിക്കപ്പെടുകയും ബാഷ്പീകരിക്കപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു4,9. പല ജൈവ പരീക്ഷണങ്ങളിലും, NaHS വെള്ളത്തിൽ ലയിക്കുന്നു, അതിന്റെ ഫലമായി നിഷ്ക്രിയ ബാഷ്പീകരണവും H2S10,11,12 ന്റെ നഷ്ടവും, H2S11,12,13 ന്റെ സ്വയമേവയുള്ള ഓക്സീകരണവും, ഫോട്ടോലൈസിസും14 എന്നിവ സംഭവിക്കുന്നു. H2S11 ന്റെ ബാഷ്പീകരണത്താൽ യഥാർത്ഥ ലായനിയിലെ സൾഫൈഡ് വളരെ വേഗത്തിൽ നഷ്ടപ്പെടുന്നു. ഒരു തുറന്ന പാത്രത്തിൽ, H2S ന്റെ അർദ്ധായുസ്സ് (t1/2) ഏകദേശം 5 മിനിറ്റാണ്, അതിന്റെ സാന്ദ്രത മിനിറ്റിൽ ഏകദേശം 13% കുറയുന്നു10. NaHS ലായനികളിൽ നിന്ന് ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് നഷ്ടപ്പെടാൻ കുറച്ച് മിനിറ്റുകൾ മാത്രമേ എടുക്കൂവെങ്കിലും, ചില മൃഗ പഠനങ്ങൾ കുടിവെള്ളത്തിൽ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന്റെ ഉറവിടമായി NaHS ലായനികൾ 1–21 ആഴ്ചകൾ ഉപയോഗിച്ചു, ഓരോ 12–24 മണിക്കൂറിലും NaHS അടങ്ങിയ ലായനി മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നു.15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 ഈ രീതി ശാസ്ത്രീയ ഗവേഷണ തത്വങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നില്ല, കാരണം മരുന്നുകളുടെ അളവ് മറ്റ് ജീവിവർഗങ്ങളിൽ, പ്രത്യേകിച്ച് മനുഷ്യരിൽ അവയുടെ ഉപയോഗത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതായിരിക്കണം.27
ബയോമെഡിസിനിലെ പ്രീക്ലിനിക്കൽ ഗവേഷണം രോഗി പരിചരണത്തിന്റെയോ ചികിത്സാ ഫലങ്ങളുടെയോ ഗുണനിലവാരം മെച്ചപ്പെടുത്താൻ ലക്ഷ്യമിടുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, മിക്ക മൃഗ പഠനങ്ങളുടെയും ഫലങ്ങൾ ഇതുവരെ മനുഷ്യരിലേക്ക് വിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടില്ല28,29,30. ഈ വിവർത്തന പരാജയത്തിന് ഒരു കാരണം മൃഗ പഠനങ്ങളുടെ രീതിശാസ്ത്രപരമായ ഗുണനിലവാരത്തിലുള്ള ശ്രദ്ധക്കുറവാണ്30. അതിനാൽ, ചില പഠനങ്ങളിൽ അവകാശപ്പെട്ടതോ നിർദ്ദേശിച്ചതോ ആയതുപോലെ, എലി/എലി വെള്ളക്കുപ്പികളിൽ തയ്യാറാക്കിയ 30 μM NaHS ലായനികൾ 12-24 മണിക്കൂർ കുടിവെള്ളത്തിൽ സ്ഥിരതയോടെ തുടരാൻ കഴിയുമോ എന്ന് അന്വേഷിക്കുക എന്നതായിരുന്നു ഈ പഠനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം.
ഇറാനിലെ ലബോറട്ടറി മൃഗങ്ങളുടെ പരിപാലനത്തിനും ഉപയോഗത്തിനുമുള്ള പ്രസിദ്ധീകരിച്ച മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായാണ് ഈ പഠനത്തിലെ എല്ലാ പരീക്ഷണങ്ങളും നടത്തിയത്31. ഈ പഠനത്തിലെ എല്ലാ പരീക്ഷണ റിപ്പോർട്ടുകളും എത്തിച്ചേരൽ മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിച്ചു32. ഷാഹിദ് ബെഹെഷ്തി മെഡിക്കൽ സയൻസസ് സർവകലാശാലയിലെ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് ഓഫ് എൻഡോക്രൈൻ സയൻസസിന്റെ എത്തിക്സ് കമ്മിറ്റി ഈ പഠനത്തിലെ എല്ലാ പരീക്ഷണ നടപടിക്രമങ്ങളും അംഗീകരിച്ചു.
സിങ്ക് അസറ്റേറ്റ് ഡൈഹൈഡ്രേറ്റ് (CAS: 5970-45-6), അൺഹൈഡ്രസ് ഫെറിക് ക്ലോറൈഡ് (CAS: 7705-08-0) എന്നിവ ബയോകെമിൽ നിന്ന്, കീമോപാഹ്രാമയിൽ (കോസ്നെ-സർ-ലോയർ, ഫ്രാൻസ്) നിന്ന് വാങ്ങി. സോഡിയം ഹൈഡ്രോസൾഫൈഡ് ഹൈഡ്രേറ്റ് (CAS: 207683-19-0), N,N-ഡൈമെഥൈൽ-പി-ഫെനൈലെനെഡിയാമൈൻ (DMPD) (CAS: 535-47-0) എന്നിവ സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ചിൽ (സെന്റ് ലൂയിസ്, MO, USA) നിന്ന് വാങ്ങി. ഐസോഫ്ലൂറേൻ പിരാമലിൽ (ബെത്‌ലഹേം, PA, USA) നിന്ന് വാങ്ങി. ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ് (HCl) മെർക്കിൽ (ഡാർംസ്റ്റാഡ്, ജർമ്മനി) നിന്ന് വാങ്ങി.
കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS (30 μM) ലായനി തയ്യാറാക്കി ഉടൻ തന്നെ അത് എലി/എലിയുടെ വെള്ളക്കുപ്പികളിലേക്ക് ഒഴിക്കുക. H2S ന്റെ ഉറവിടമായി NaHS ഉപയോഗിക്കുന്ന നിരവധി പ്രസിദ്ധീകരണങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയാണ് ഈ സാന്ദ്രത തിരഞ്ഞെടുത്തത്; ചർച്ചാ വിഭാഗം കാണുക. വ്യത്യസ്ത അളവിലുള്ള ജലാംശം അടങ്ങിയിരിക്കാവുന്ന ഒരു ജലാംശം കലർന്ന തന്മാത്രയാണ് NaHS (അതായത്, NaHS•xH2O); നിർമ്മാതാവിന്റെ അഭിപ്രായത്തിൽ, ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിൽ ഉപയോഗിച്ച NaHS ന്റെ ശതമാനം 70.7% ആയിരുന്നു (അതായത്, NaHS•1.3 H2O), ഞങ്ങളുടെ കണക്കുകൂട്ടലുകളിൽ ഈ മൂല്യം ഞങ്ങൾ കണക്കിലെടുത്തിരുന്നു, അവിടെ ഞങ്ങൾ 56.06 g/mol എന്ന തന്മാത്രാ ഭാരം ഉപയോഗിച്ചു, ഇത് അൺഹൈഡ്രസ് NaHS ന്റെ തന്മാത്രാ ഭാരമാണ്. സ്ഫടിക ഘടന ഉണ്ടാക്കുന്ന ജല തന്മാത്രകളാണ് ഹൈഡ്രേഷൻ വെള്ളം (സ്ഫടികവൽക്കരണ വെള്ളം എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു). അൺഹൈഡ്രേറ്റുകളെ അപേക്ഷിച്ച് ഹൈഡ്രേറ്റുകൾക്ക് വ്യത്യസ്ത ഭൗതികവും താപവൈദ്യുത ഗുണങ്ങളുമുണ്ട്34.
കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS ചേർക്കുന്നതിനുമുമ്പ്, ലായകത്തിന്റെ pH ഉം താപനിലയും അളക്കുക. മൃഗങ്ങളുടെ കൂട്ടിലെ എലി/എലി വെള്ളക്കുപ്പിയിലേക്ക് NaHS ലായനി ഉടൻ ഒഴിക്കുക. സൾഫൈഡ് അളവ് അളക്കുന്നതിനായി 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 24 മണിക്കൂറുകളിൽ അഗ്രത്തിൽ നിന്നും വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ ഉള്ളിൽ നിന്നും സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ചു. ഓരോ സാമ്പിളിംഗിനും തൊട്ടുപിന്നാലെ സൾഫൈഡ് അളവുകൾ എടുത്തു. വാട്ടർ ട്യൂബിന്റെ ചെറിയ സുഷിര വലുപ്പം H2S ബാഷ്പീകരണം കുറയ്ക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ചില പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുള്ളതിനാൽ ട്യൂബിന്റെ അഗ്രത്തിൽ നിന്ന് ഞങ്ങൾക്ക് സാമ്പിളുകൾ ലഭിച്ചു. കുപ്പിയിലെ ലായനിയിലും ഈ പ്രശ്നം ബാധകമാണെന്ന് തോന്നുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഉയർന്ന ബാഷ്പീകരണ നിരക്ക് ഉള്ളതും ഓട്ടോഓക്സിഡൈസിംഗ് നടത്തുന്നതുമായ വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ കഴുത്തിലെ ലായനിയുടെ കാര്യത്തിൽ ഇത് സംഭവിച്ചില്ല; വാസ്തവത്തിൽ, മൃഗങ്ങൾ ആദ്യം ഈ വെള്ളം കുടിച്ചു.
പഠനത്തിൽ ആൺ, പെൺ വിസ്റ്റാർ എലികളെ ഉപയോഗിച്ചു. പോളിപ്രൊപ്പിലീൻ കൂടുകളിൽ (ഒരു കൂട്ടിൽ 2–3 എലികൾ) സാധാരണ സാഹചര്യങ്ങളിൽ (താപനില 21–26 °C, ഈർപ്പം 32–40%) 12 മണിക്കൂർ വെളിച്ചവും (രാവിലെ 7 മുതൽ വൈകുന്നേരം 7 വരെ) 12 മണിക്കൂർ ഇരുട്ടും (രാത്രി 7 മുതൽ രാവിലെ 7 വരെ) എലികളെ പാർപ്പിച്ചു. എലികൾക്ക് ടാപ്പ് വെള്ളം സൗജന്യമായി ലഭിച്ചു, കൂടാതെ സ്റ്റാൻഡേർഡ് ചൗ (ഖോറക് ഡാം പാർസ് കമ്പനി, ടെഹ്‌റാൻ, ഇറാൻ) നൽകി. പ്രായവുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന (6 മാസം) പെൺ (n=10, ശരീരഭാരം: 190–230 ഗ്രാം) ആൺ (n=10, ശരീരഭാരം: 320–370 ഗ്രാം) വിസ്റ്റാർ എലികളെ ക്രമരഹിതമായി നിയന്ത്രണ, NaHS (30 μM) ചികിത്സ ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു (ഗ്രൂപ്പിൽ n=5). സാമ്പിൾ വലുപ്പം നിർണ്ണയിക്കാൻ, മുൻ അനുഭവവും പവർ വിശകലനവും സംയോജിപ്പിക്കുന്ന KISS (കീപ്പ് ഇറ്റ് സിമ്പിൾ, സ്റ്റുപ്പിഡ്) സമീപനം ഞങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചു35. ഞങ്ങൾ ആദ്യം 3 എലികളിൽ ഒരു പൈലറ്റ് പഠനം നടത്തി ശരാശരി സെറം ടോട്ടൽ സൾഫൈഡ് ലെവലും സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനും (8.1 ± 0.81 μM) നിർണ്ണയിച്ചു. തുടർന്ന്, 80% പവർ പരിഗണിച്ച് രണ്ട് വശങ്ങളുള്ള 5% പ്രാധാന്യ നില കണക്കാക്കി, പരീക്ഷണാത്മക മൃഗങ്ങളുടെ സാമ്പിൾ വലുപ്പം കണക്കാക്കുന്നതിനായി ഫെസ്റ്റിംഗ് നിർദ്ദേശിച്ച മുൻകൂട്ടി നിശ്ചയിച്ച മൂല്യമുള്ള 2.02 എന്ന സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഇഫക്റ്റ് വലുപ്പവുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഒരു പ്രാഥമിക സാമ്പിൾ വലുപ്പം (മുൻ സാഹിത്യത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി n = 5) ഞങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു. ഈ മൂല്യത്തെ SD (2.02 × 0.81) കൊണ്ട് ഗുണിച്ച ശേഷം, പ്രവചിക്കപ്പെട്ട കണ്ടെത്താവുന്ന ഇഫക്റ്റ് വലുപ്പം (1.6 μM) 20% ആയിരുന്നു, ഇത് സ്വീകാര്യമാണ്. ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ 20% ശരാശരി മാറ്റം കണ്ടെത്താൻ n = 5/ഗ്രൂപ്പ് മതിയെന്നാണ് ഇതിനർത്ഥം. എക്സൽ സോഫ്റ്റ്‌വെയർ 36 ന്റെ റാൻഡം ഫംഗ്ഷൻ ഉപയോഗിച്ച് എലികളെ കൺട്രോൾ, NaSH-ചികിത്സിച്ച ഗ്രൂപ്പുകളായി ക്രമരഹിതമായി വിഭജിച്ചു (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 1). ഫല തലത്തിൽ ബ്ലൈൻഡിംഗ് നടത്തി, ബയോകെമിക്കൽ അളവുകൾ നടത്തുന്ന അന്വേഷകർക്ക് ഗ്രൂപ്പ് അസൈൻമെന്റുകളെക്കുറിച്ച് അറിയില്ലായിരുന്നു.
രണ്ട് ലിംഗങ്ങളിലുമുള്ള NaHS ഗ്രൂപ്പുകളെ കുടിവെള്ളത്തിൽ തയ്യാറാക്കിയ 30 μM NaHS ലായനി ഉപയോഗിച്ച് രണ്ടാഴ്ചത്തേക്ക് ചികിത്സിച്ചു; ഓരോ 24 മണിക്കൂറിലും പുതിയ ലായനി നൽകി, ഈ സമയത്ത് ശരീരഭാരവും അളന്നു. ഒന്നും രണ്ടും ആഴ്ചകളുടെ അവസാനം, ഐസോഫ്ലൂറേൻ അനസ്തേഷ്യയിൽ എല്ലാ എലികളുടെയും വാൽ അറ്റങ്ങളിൽ നിന്ന് രക്ത സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ചു. രക്ത സാമ്പിളുകൾ 3000 ഗ്രാം താപനിലയിൽ 10 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു, സെറം വേർതിരിച്ച് -80°C ൽ സൂക്ഷിച്ചു, തുടർന്ന് സെറം യൂറിയ, ക്രിയേറ്റിനിൻ (Cr), മൊത്തം സൾഫൈഡ് എന്നിവയുടെ അളവ് അളക്കാൻ. എൻസൈമാറ്റിക് യൂറിയ രീതി ഉപയോഗിച്ചാണ് സെറം യൂറിയ നിർണ്ണയിച്ചത്, വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമായ കിറ്റുകളും (മാൻ കമ്പനി, ടെഹ്‌റാൻ, ഇറാൻ) ഒരു ഓട്ടോമാറ്റിക് അനലൈസറും (സെലക്ട്ര E, സീരിയൽ നമ്പർ 0-2124, നെതർലാൻഡ്‌സ്) ഉപയോഗിച്ച് ഫോട്ടോമെട്രിക് ജാഫെ രീതി ഉപയോഗിച്ചാണ് സെറം ക്രിയേറ്റിനിൻ നിർണ്ണയിച്ചത്. യൂറിയയ്ക്കും Cr-നും ഉള്ള വ്യതിയാനത്തിന്റെ ഇൻട്രാ-, ഇന്ററാസെ ഗുണകങ്ങൾ 2.5% ൽ താഴെയായിരുന്നു.
മെത്തിലീൻ നീല (MB) രീതി കുടിവെള്ളത്തിലും NaHS അടങ്ങിയ സെറമിലും ആകെ സൾഫൈഡ് അളക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു; ബൾക്ക് ലായനികളിലും ജൈവ സാമ്പിളുകളിലും സൾഫൈഡ് അളക്കുന്നതിന് ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതി MB ആണ്11,37. മൊത്തം സൾഫൈഡ് പൂൾ കണക്കാക്കാനും ജലീയ ഘട്ടത്തിൽ H2S, HS-, S2 എന്നിവയുടെ രൂപത്തിലുള്ള അജൈവ സൾഫൈഡുകൾ അളക്കാനും MB രീതി ഉപയോഗിക്കാം38. ഈ രീതിയിൽ, സിങ്ക് അസറ്റേറ്റിന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ സൾഫർ സിങ്ക് സൾഫൈഡ് (ZnS) ആയി അവക്ഷിപ്തമാക്കപ്പെടുന്നു11,38. മറ്റ് ക്രോമോഫോറുകളിൽ നിന്ന് സൾഫൈഡുകൾ വേർതിരിക്കുന്നതിന് സിങ്ക് അസറ്റേറ്റ് അവക്ഷിപ്തമാക്കുന്നത് ഏറ്റവും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതിയാണ്11. ശക്തമായ അസിഡിക് സാഹചര്യങ്ങളിൽ HCl11 ഉപയോഗിച്ച് ZnS വീണ്ടും ലയിപ്പിച്ചു. ഫെറിക് ക്ലോറൈഡ് (Fe3+ ഒരു ഓക്സിഡൈസിംഗ് ഏജന്റായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു) ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്ന ഒരു പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൽ സൾഫൈഡ് 1:2 എന്ന സ്റ്റോയിക്കിയോമെട്രിക് അനുപാതത്തിൽ DMPD യുമായി പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച് ഡൈ MB രൂപപ്പെടുന്നു, ഇത് 670 nm40,41 ൽ സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിക് ആയി കണ്ടെത്തുന്നു. MB രീതിയുടെ കണ്ടെത്തൽ പരിധി ഏകദേശം 1 μM11 ആണ്.
ഈ പഠനത്തിൽ, ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും 100 μL (ലായനി അല്ലെങ്കിൽ സെറം) ഒരു ട്യൂബിലേക്ക് ചേർത്തു; തുടർന്ന് 200 μL സിങ്ക് അസറ്റേറ്റ് (വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ 1% w/v), 100 μL DMPD (7.2 M HCl-ൽ 20 mM), 133 μL FeCl3 (1.2 M HCl-ൽ 30 mM) എന്നിവ ചേർത്തു. മിശ്രിതം 37°C താപനിലയിൽ ഇരുട്ടിൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. ലായനി 10,000 ഗ്രാം താപനിലയിൽ 10 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു, സൂപ്പർനേറ്റന്റിന്റെ ആഗിരണം 670 nm താപനിലയിൽ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് റീഡർ (ബയോടെക്, MQX2000R2, വിനോസ്കി, VT, USA) ഉപയോഗിച്ച് വായിച്ചു. ddH2O-യിലെ NaHS (0–100 μM) കാലിബ്രേഷൻ കർവ് ഉപയോഗിച്ചാണ് സൾഫൈഡ് സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിച്ചത് (അനുബന്ധ ചിത്രം 2). അളവുകൾക്കായി ഉപയോഗിക്കുന്ന എല്ലാ ലായനികളും പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയതാണ്. സൾഫൈഡ് അളവുകൾക്കുള്ള ഇൻട്രാ-, ഇന്റർഅസേ വേരിയേഷൻ ഗുണകങ്ങൾ യഥാക്രമം 2.8% ഉം 3.4% ഉം ആയിരുന്നു. ഫോർട്ടിഫൈഡ് സാമ്പിൾ രീതി ഉപയോഗിച്ച് സോഡിയം തയോസൾഫേറ്റ് അടങ്ങിയ കുടിവെള്ളത്തിൽ നിന്നും സെറം സാമ്പിളുകളിൽ നിന്നും കണ്ടെടുത്ത ആകെ സൾഫൈഡും ഞങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു42. സോഡിയം തയോസൾഫേറ്റ് അടങ്ങിയ കുടിവെള്ളത്തിന്റെയും സെറം സാമ്പിളുകളുടെയും വീണ്ടെടുക്കലുകൾ യഥാക്രമം 91 ± 1.1% (n = 6), 93 ± 2.4% (n = 6) ആയിരുന്നു.
വിൻഡോസിനായുള്ള ഗ്രാഫ്പാഡ് പ്രിസം സോഫ്റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 8.0.2 ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം നടത്തി (ഗ്രാഫ്പാഡ് സോഫ്റ്റ്‌വെയർ, സാൻ ഡീഗോ, സിഎ, യുഎസ്എ, www.graphpad.com). NaHS ചേർക്കുന്നതിന് മുമ്പും ശേഷവുമുള്ള കുടിവെള്ളത്തിന്റെ താപനിലയും pH ഉം താരതമ്യം ചെയ്യാൻ ഒരു ജോടിയാക്കിയ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചു. NaHS അടങ്ങിയ ലായനിയിൽ H2S ന്റെ നഷ്ടം അടിസ്ഥാന ആഗിരണം മുതൽ ഒരു ശതമാനം കുറവായി കണക്കാക്കി, നഷ്ടം സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കനുസരിച്ച് പ്രാധാന്യമുള്ളതാണോ എന്ന് വിലയിരുത്താൻ, ഞങ്ങൾ ഒരു വൺ-വേ ആവർത്തിച്ചുള്ള അളവുകൾ ANOVA നടത്തി, തുടർന്ന് ഡണ്ണറ്റിന്റെ മൾട്ടിപ്പിൾ താരതമ്യ പരിശോധന നടത്തി. ശരീരഭാരവും സെറം യൂറിയയും സെറം ക്രിയേറ്റിനിനും കാലക്രമേണ ആകെ സെറം സൾഫൈഡും വ്യത്യസ്ത ലിംഗത്തിലുള്ള നിയന്ത്രണ, NaHS ചികിത്സിച്ച എലികൾക്കിടയിൽ ടു-വേ മിക്സഡ് (ഇടയിൽ-ഉള്ളിൽ) ANOVA ഉപയോഗിച്ച് താരതമ്യം ചെയ്തു, തുടർന്ന് ഒരു ബോൺഫെറോണി പോസ്റ്റ് ഹോക്ക് ടെസ്റ്റ് നടത്തി. ടു-ടെയിൽഡ് പി മൂല്യങ്ങൾ < 0.05 സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കനുസരിച്ച് പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കി.
NaHS ചേർക്കുന്നതിന് മുമ്പ് കുടിവെള്ളത്തിന്റെ pH 7.60 ± 0.01 ഉം NaHS ചേർത്തതിന് ശേഷം 7.71 ± 0.03 ഉം ആയിരുന്നു (n = 13, p = 0.0029). കുടിവെള്ളത്തിന്റെ താപനില 26.5 ± 0.2 ആയിരുന്നു, NaHS ചേർത്തതിന് ശേഷം 26.2 ± 0.2 ആയി കുറഞ്ഞു (n = 13, p = 0.0128). കുടിവെള്ളത്തിൽ 30 μM NaHS ലായനി തയ്യാറാക്കി ഒരു വാട്ടർ ബോട്ടിലിൽ സൂക്ഷിക്കുക. NaHS ലായനി അസ്ഥിരമാണ്, കാലക്രമേണ അതിന്റെ സാന്ദ്രത കുറയുന്നു. വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ കഴുത്തിൽ നിന്ന് സാമ്പിൾ എടുക്കുമ്പോൾ, ആദ്യ മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ഗണ്യമായ കുറവ് (68.0%) നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു, കൂടാതെ ലായനിയിലെ NaHS ഉള്ളടക്കം 12 ഉം 24 ഉം മണിക്കൂറുകൾക്ക് ശേഷം യഥാക്രമം 72% ഉം 75% ഉം കുറഞ്ഞു. വാട്ടർ ബോട്ടിലുകളിൽ നിന്ന് ലഭിച്ച സാമ്പിളുകളിൽ, 2 മണിക്കൂർ വരെ NaHS-ൽ കാര്യമായ കുറവ് ഉണ്ടായിരുന്നില്ല, എന്നാൽ 12 ഉം 24 ഉം മണിക്കൂറുകൾക്ക് ശേഷം അത് യഥാക്രമം 47% ഉം 72% ഉം കുറഞ്ഞു. കുടിവെള്ളത്തിൽ തയ്യാറാക്കിയ 30 μM ലായനിയിലെ NaHS-ന്റെ ശതമാനം, സാമ്പിൾ ചെയ്ത സ്ഥലം പരിഗണിക്കാതെ, 24 മണിക്കൂറിനു ശേഷം പ്രാരംഭ മൂല്യത്തിന്റെ ഏകദേശം നാലിലൊന്നായി കുറഞ്ഞുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു (ചിത്രം 1).
എലി/എലി കുപ്പികളിലെ കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS ലായനിയുടെ (30 μM) സ്ഥിരത. ലായനി തയ്യാറാക്കിയ ശേഷം, അഗ്രത്തിൽ നിന്നും വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ ഉൾഭാഗത്തുനിന്നും സാമ്പിളുകൾ എടുത്തു. ഡാറ്റ ശരാശരി ± SD (n = 6/ഗ്രൂപ്പ്) ആയി അവതരിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. * ഉം # ഉം, P < 0.05 ഉം സമയം 0 മായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ. വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ ഫോട്ടോയിൽ അഗ്രവും (തുറക്കലോടെ) കുപ്പിയുടെ ബോഡിയും കാണിക്കുന്നു. ടിപ്പിന്റെ അളവ് ഏകദേശം 740 μL ആണ്.
പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയ 30 μM ലായനിയിൽ NaHS ന്റെ സാന്ദ്രത 30.3 ± 0.4 μM ആയിരുന്നു (പരിധി: 28.7–31.9 μM, n = 12). എന്നിരുന്നാലും, 24 മണിക്കൂറിനു ശേഷം, NaHS ന്റെ സാന്ദ്രത കുറഞ്ഞ മൂല്യത്തിലേക്ക് കുറഞ്ഞു (ശരാശരി: 3.0 ± 0.6 μM). ചിത്രം 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, പഠന കാലയളവിൽ എലികൾ സമ്പർക്കത്തിൽ വന്ന NaHS ന്റെ സാന്ദ്രത സ്ഥിരമായിരുന്നില്ല.
പെൺ എലികളുടെ ശരീരഭാരം കാലക്രമേണ ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു (കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിൽ 205.2 ± 5.2 ഗ്രാം മുതൽ 213.8 ± 7.0 ഗ്രാം വരെയും NaHS ചികിത്സിച്ച ഗ്രൂപ്പിൽ 204.0 ± 8.6 ഗ്രാം മുതൽ 211.8 ± 7.5 ഗ്രാം വരെയും); എന്നിരുന്നാലും, NaHS ചികിത്സ ശരീരഭാരത്തെ ബാധിച്ചില്ല (ചിത്രം 3). ആൺ എലികളുടെ ശരീരഭാരം കാലക്രമേണ ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു (കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിൽ 338.6 ± 8.3 ഗ്രാം മുതൽ 352.4 ± 6.0 ഗ്രാം വരെയും NaHS ചികിത്സിച്ച ഗ്രൂപ്പിൽ 352.4 ± 5.9 ഗ്രാം മുതൽ 363.2 ± 4.3 ഗ്രാം വരെയും); എന്നിരുന്നാലും, NaHS ചികിത്സ ശരീരഭാരത്തെ ബാധിച്ചില്ല (ചിത്രം 3).
NaHS (30 μM) നൽകിയതിനുശേഷം സ്ത്രീ, പുരുഷ എലികളിൽ ശരീരഭാരത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ. ഡാറ്റ ശരാശരി ± SEM ആയി അവതരിപ്പിക്കുകയും ബോൺഫെറോണി പോസ്റ്റ് ഹോക്ക് ടെസ്റ്റുമായുള്ള വേരിയൻസിന്റെ ടു-വേ മിക്സഡ് (ഇടയ്ക്കുള്ളിൽ) വിശകലനം ഉപയോഗിച്ച് താരതമ്യം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലെയും ഓരോ ലിംഗത്തിന്റെയും n = 5.
പഠനത്തിലുടനീളം നിയന്ത്രണ എലികളിലും NaSH ചികിത്സിച്ച എലികളിലും സെറം യൂറിയയുടെയും ക്രിയേറ്റിൻ ഫോസ്ഫേറ്റിന്റെയും സാന്ദ്രത താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതായിരുന്നു. കൂടാതെ, NaSH ചികിത്സ സെറം യൂറിയയെയും ക്രിയേറ്റിൻക്രോം സാന്ദ്രതയെയും ബാധിച്ചില്ല (പട്ടിക 1).
നിയന്ത്രണ എലികളിലും NaHS ചികിത്സിച്ച ആൺ എലികളിലും (8.1 ± 0.5 μM vs. 9.3 ± 0.2 μM) പെൺ എലികളിലും (9.1 ± 1.0 μM vs. 6.1 ± 1.1 μM) പെൺ എലികളിലും സെറം മൊത്തം സൾഫൈഡ് സാന്ദ്രത താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ്. ആൺ എലികളിലോ പെൺ എലികളിലോ 14 ദിവസത്തേക്ക് NaHS നൽകുന്നത് സെറം മൊത്തം സൾഫൈഡ് അളവിനെ ബാധിച്ചില്ല (ചിത്രം 4).
NaHS (30 μM) നൽകിയതിനുശേഷം ആൺ, പെൺ എലികളിലെ സെറം മൊത്തം സൾഫൈഡ് സാന്ദ്രതയിലെ മാറ്റങ്ങൾ. ഡാറ്റ ശരാശരി ± SEM ആയി അവതരിപ്പിക്കുകയും ബോൺഫെറോണി പോസ്റ്റ് ഹോക്ക് ടെസ്റ്റുമായുള്ള വേരിയൻസിന്റെ രണ്ട്-വഴി മിക്സഡ് (ഉള്ളിൽ) വിശകലനം ഉപയോഗിച്ച് താരതമ്യം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. ഓരോ ലിംഗവും, n = 5/ഗ്രൂപ്പ്.
ഈ പഠനത്തിന്റെ പ്രധാന നിഗമനം, NaHS അടങ്ങിയ കുടിവെള്ളം അസ്ഥിരമാണ് എന്നതാണ്: എലി/എലി വെള്ളക്കുപ്പികളുടെ അഗ്രഭാഗത്തും അകത്തും നിന്ന് സാമ്പിൾ എടുത്ത് 24 മണിക്കൂറിനുശേഷം പ്രാരംഭ ആകെ സൾഫൈഡ് ഉള്ളടക്കത്തിന്റെ നാലിലൊന്ന് മാത്രമേ കണ്ടെത്താൻ കഴിയൂ. കൂടാതെ, NaHS ലായനിയിൽ H2S നഷ്ടപ്പെട്ടതിനാൽ എലികൾ അസ്ഥിരമായ NaHS സാന്ദ്രതയ്ക്ക് വിധേയമായി, കൂടാതെ കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS ചേർക്കുന്നത് ശരീരഭാരത്തെയോ, സെറം യൂറിയയെയോ, ക്രിയേറ്റിൻ ക്രോമിയത്തെയോ, മൊത്തം സെറം സൾഫൈഡിനെയോ ബാധിച്ചില്ല.
ഈ പഠനത്തിൽ, കുടിവെള്ളത്തിൽ തയ്യാറാക്കിയ 30 μM NaHS ലായനികളിൽ നിന്നുള്ള H2S നഷ്ടത്തിന്റെ നിരക്ക് മണിക്കൂറിൽ ഏകദേശം 3% ആയിരുന്നു. ഒരു ബഫർ ചെയ്ത ലായനിയിൽ (10 mM PBS-ൽ 100 ​​μM സോഡിയം സൾഫൈഡ്, pH 7.4), സൾഫൈഡ് സാന്ദ്രത 8 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ കാലക്രമേണ 7% കുറയുന്നതായി റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടു. കുടിവെള്ളത്തിലെ 54 μM NaHS ലായനിയിൽ നിന്നുള്ള സൾഫൈഡ് നഷ്ടത്തിന്റെ നിരക്ക് മണിക്കൂറിൽ ഏകദേശം 2.3% ആണെന്ന് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തുകൊണ്ട് ഞങ്ങൾ മുമ്പ് NaHS ന്റെ ഇൻട്രാപെരിറ്റോണിയൽ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷനെ പ്രതിരോധിച്ചു (ആദ്യത്തെ 12 മണിക്കൂറിൽ 4%/മണിക്കൂറും തയ്യാറാക്കിയതിന് ശേഷമുള്ള അവസാന 12 മണിക്കൂറിൽ 1.4%/മണിക്കൂറും).8. മുൻകാല പഠനങ്ങൾ43 NaHS ലായനികളിൽ നിന്ന് H2S ന്റെ സ്ഥിരമായ നഷ്ടം കണ്ടെത്തി, പ്രധാനമായും ബാഷ്പീകരണവും ഓക്സീകരണവും കാരണം. കുമിളകൾ ചേർക്കാതെ തന്നെ, H2S ബാഷ്പീകരണത്താൽ സ്റ്റോക്ക് ലായനിയിലെ സൾഫൈഡ് വേഗത്തിൽ നഷ്ടപ്പെടുന്നു11. പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് ഏകദേശം 30-60 സെക്കൻഡ് എടുക്കുന്ന നേർപ്പിക്കൽ പ്രക്രിയയിൽ, ബാഷ്പീകരണം മൂലം ഏകദേശം 5-10% H2S നഷ്ടപ്പെടുന്നു എന്നാണ്6. ലായനിയിൽ നിന്ന് H2S ബാഷ്പീകരിക്കപ്പെടുന്നത് തടയാൻ, ഗവേഷകർ ലായനി മൃദുവായി ഇളക്കുക, പ്ലാസ്റ്റിക് ഫിലിം ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റോക്ക് ലായനി മൂടുക6, ലായനി വായുവിലേക്ക് എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നത് കുറയ്ക്കുക എന്നിവയുൾപ്പെടെ നിരവധി നടപടികൾ സ്വീകരിച്ചിട്ടുണ്ട്, കാരണം H2S ബാഷ്പീകരണ നിരക്ക് വായു-ദ്രാവക ഇന്റർഫേസിനെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു.13 H2S ന്റെ സ്വാഭാവിക ഓക്സീകരണം പ്രധാനമായും സംഭവിക്കുന്നത് സംക്രമണ ലോഹ അയോണുകൾ മൂലമാണ്, പ്രത്യേകിച്ച് ഫെറിക് ഇരുമ്പ്, ഇവ വെള്ളത്തിലെ മാലിന്യങ്ങളാണ്.13 H2S ന്റെ ഓക്സീകരണം പോളിസൾഫൈഡുകൾ (സഹസംയോജക ബോണ്ടുകളാൽ ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന സൾഫർ ആറ്റങ്ങൾ)11 രൂപപ്പെടുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു. ഓക്സീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ, H2S അടങ്ങിയ ലായനികൾ ഡീഓക്സിജനേറ്റഡ് ലായകങ്ങളിൽ തയ്യാറാക്കുന്നു44,45 തുടർന്ന് ഡീഓക്സിജനേഷൻ ഉറപ്പാക്കാൻ 20-30 മിനിറ്റ് ആർഗോൺ അല്ലെങ്കിൽ നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുന്നു.11,12,37,44,45,46 ഡൈഎത്തിലീൻട്രിയമിൻപെന്റഅസെറ്റിക് ആസിഡ് (DTPA) ഒരു ലോഹ ചേലേറ്ററാണ് (10–4 M), ഇത് എയറോബിക് ലായനികളിൽ HS- ഓക്സിഡേഷൻ തടയുന്നു. DTPA യുടെ അഭാവത്തിൽ, HS- ന്റെ ഓക്സിഡേഷൻ നിരക്ക് ഏകദേശം 3 മണിക്കൂറിൽ ഏകദേശം 50% ആണ് 25°C37,47. കൂടാതെ, 1e-സൾഫൈഡിന്റെ ഓക്സീകരണം അൾട്രാവയലറ്റ് രശ്മികളാൽ ഉത്തേജിപ്പിക്കപ്പെടുന്നതിനാൽ, ലായനി ഐസിൽ സൂക്ഷിക്കുകയും വെളിച്ചത്തിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കുകയും വേണം11.
ചിത്രം 5-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, വെള്ളത്തിൽ ലയിക്കുമ്പോൾ NaHS വിഘടിക്കുന്നു Na+, HS-6 എന്നിവയായി മാറുന്നു; ഈ വിഘടിപ്പിക്കൽ പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന്റെ pK1 ആണ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്, ഇത് താപനിലയെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു: pK1 = 3.122 + 1132/T, ഇവിടെ T 5 മുതൽ 30°C വരെയാണ്, ഇത് കെൽവിൻ (K), K = °C + 273.1548 ഡിഗ്രികളിൽ അളക്കുന്നു. HS- ന് ഉയർന്ന pK2 (pK2 = 19) ഉണ്ട്, അതിനാൽ pH < 96.49 ൽ, S2- രൂപപ്പെടുന്നില്ല അല്ലെങ്കിൽ വളരെ ചെറിയ അളവിൽ രൂപപ്പെടുന്നില്ല. ഇതിനു വിപരീതമായി, HS- ഒരു ബേസായി പ്രവർത്തിക്കുകയും ഒരു H2O തന്മാത്രയിൽ നിന്ന് H+ സ്വീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ H2O ഒരു ആസിഡായി പ്രവർത്തിക്കുകയും H2S, OH- എന്നിവയിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു.
NaHS ലായനിയിൽ (30 µM) ലയിച്ച H2S വാതകത്തിന്റെ രൂപീകരണം. aq, ജലീയ ലായനി; g, വാതകം; l, ദ്രാവകം. എല്ലാ കണക്കുകൂട്ടലുകളും ജലത്തിന്റെ pH = 7.0 ഉം ജലത്തിന്റെ താപനില = 20 °C ഉം ആണെന്ന് അനുമാനിക്കുന്നു. BioRender.com ഉപയോഗിച്ച് സൃഷ്ടിച്ചത്.
NaHS ലായനികൾ അസ്ഥിരമാണെന്നതിന് തെളിവുകൾ ഉണ്ടായിരുന്നിട്ടും, നിരവധി മൃഗ പഠനങ്ങൾ കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS ലായനികൾ ഒരു H2S ദാതാവ് സംയുക്തമായി ഉപയോഗിച്ചിട്ടുണ്ട്15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 ഇടപെടലുകളുടെ ദൈർഘ്യം 1 മുതൽ 21 ആഴ്ച വരെയാണ് (പട്ടിക 2). ഈ പഠനങ്ങളിൽ, ഓരോ 12 മണിക്കൂർ, 15, 17, 18, 24, 25 മണിക്കൂർ അല്ലെങ്കിൽ 24 മണിക്കൂർ, 19, 20, 21, 22, 23 മണിക്കൂറിലും NaHS ലായനി പുതുക്കി. NaHS ലായനിയിൽ നിന്ന് H2S നഷ്ടപ്പെടുന്നതിനാൽ എലികൾ അസ്ഥിരമായ മയക്കുമരുന്ന് സാന്ദ്രതയ്ക്ക് വിധേയമായതായും എലികളുടെ കുടിവെള്ളത്തിലെ NaHS ഉള്ളടക്കം 12 അല്ലെങ്കിൽ 24 മണിക്കൂറിൽ ഗണ്യമായി ഏറ്റക്കുറച്ചിലുകൾ ഉണ്ടായതായും ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു (ചിത്രം 2 കാണുക). ഈ പഠനങ്ങളിൽ രണ്ടെണ്ണം 24 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ വെള്ളത്തിൽ H2S അളവ് സ്ഥിരമായി നിലനിന്നിരുന്നുവെന്നും അല്ലെങ്കിൽ 12 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ 2–3% H2S നഷ്ടം മാത്രമേ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടുള്ളൂവെന്നും റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു, എന്നാൽ അവ പിന്തുണയ്ക്കുന്ന ഡാറ്റയോ അളവെടുപ്പ് വിശദാംശങ്ങളോ നൽകിയില്ല. വാട്ടർ ബോട്ടിലുകളുടെ ചെറിയ വ്യാസം H2S ബാഷ്പീകരണം കുറയ്ക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് രണ്ട് പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്. എന്നിരുന്നാലും, ഇത് ഒരു വാട്ടർ ബോട്ടിലിൽ നിന്നുള്ള H2S നഷ്ടം 12–24 മണിക്കൂറിനേക്കാൾ 2 മണിക്കൂർ മാത്രമേ വൈകിപ്പിക്കൂ എന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു. കുടിവെള്ളത്തിലെ NaHS ലെവൽ മാറിയിട്ടില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ അനുമാനിക്കുന്നതായി രണ്ട് പഠനങ്ങളും ശ്രദ്ധിക്കുന്നു, കാരണം വെള്ളത്തിൽ നിറവ്യത്യാസം ഞങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നില്ല; അതിനാൽ, വായുവിലൂടെ H2S ന്റെ ഓക്സീകരണം കാര്യമായിരുന്നില്ല19,20. അതിശയകരമെന്നു പറയട്ടെ, കാലക്രമേണ അതിന്റെ സാന്ദ്രതയിലെ മാറ്റം അളക്കുന്നതിനുപകരം ഈ ആത്മനിഷ്ഠമായ രീതി വെള്ളത്തിൽ NaHS ന്റെ സ്ഥിരത വിലയിരുത്തുന്നു.
NaHS ലായനിയിലെ H2S ന്റെ നഷ്ടം pH ഉം താപനിലയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിൽ സൂചിപ്പിച്ചതുപോലെ, വെള്ളത്തിൽ NaHS ലയിക്കുന്നത് ഒരു ആൽക്കലൈൻ ലായനിയുടെ രൂപീകരണത്തിന് കാരണമാകുന്നു50. NaHS വെള്ളത്തിൽ ലയിക്കുമ്പോൾ, ലയിച്ചിരിക്കുന്ന H2S വാതകത്തിന്റെ രൂപീകരണം pH മൂല്യത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു6. ലായനിയുടെ pH കുറയുമ്പോൾ, H2S വാതക തന്മാത്രകളായി NaHS ന്റെ അനുപാതം വർദ്ധിക്കുകയും ജലീയ ലായനിയിൽ നിന്ന് കൂടുതൽ സൾഫൈഡ് നഷ്ടപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു11. ഈ പഠനങ്ങളൊന്നും NaHS-ന് ലായകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന കുടിവെള്ളത്തിന്റെ pH റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടില്ല. മിക്ക രാജ്യങ്ങളും സ്വീകരിക്കുന്ന WHO ശുപാർശകൾ അനുസരിച്ച്, കുടിവെള്ളത്തിന്റെ pH 6.5–8.551 പരിധിയിലായിരിക്കണം. ഈ pH ശ്രേണിയിൽ, H2S ന്റെ സ്വയമേവയുള്ള ഓക്സീകരണ നിരക്ക് ഏകദേശം പത്തിരട്ടി വർദ്ധിക്കുന്നു13. ഈ pH ശ്രേണിയിൽ വെള്ളത്തിൽ NaHS ലയിപ്പിക്കുന്നത് 1 മുതൽ 22.5 μM വരെ ലയിച്ച H2S വാതക സാന്ദ്രതയ്ക്ക് കാരണമാകും, ഇത് NaHS ലയിപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് വെള്ളത്തിന്റെ pH നിരീക്ഷിക്കേണ്ടതിന്റെ പ്രാധാന്യം ഊന്നിപ്പറയുന്നു. കൂടാതെ, മുകളിൽ പറഞ്ഞ പഠനത്തിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിരിക്കുന്ന താപനില പരിധി (18–26 °C) ലായനിയിലെ ലയിച്ച H2S വാതകത്തിന്റെ സാന്ദ്രതയിൽ ഏകദേശം 10% മാറ്റത്തിന് കാരണമാകും, കാരണം താപനില മാറ്റങ്ങൾ pK1-നെ മാറ്റുന്നു, കൂടാതെ pK1-ലെ ചെറിയ മാറ്റങ്ങൾ അലിഞ്ഞുപോയ H2S വാതകത്തിന്റെ സാന്ദ്രതയിൽ കാര്യമായ സ്വാധീനം ചെലുത്തും48. കൂടാതെ, ചില പഠനങ്ങളുടെ (5 മാസം)22 ദൈർഘ്യമേറിയതും, ആ സമയത്ത് വലിയ താപനില വ്യതിയാനം പ്രതീക്ഷിക്കുന്നതും ഈ പ്രശ്നം കൂടുതൽ വഷളാക്കുന്നു.
ഒരു പഠനമൊഴികെ മറ്റെല്ലാ പഠനങ്ങളും കുടിവെള്ളത്തിൽ 30 μM NaHS ലായനി ഉപയോഗിച്ചു. ഉപയോഗിച്ച അളവ് (അതായത് 30 μM) വിശദീകരിക്കാൻ, ജലീയ ഘട്ടത്തിൽ NaHS H2S വാതകത്തിന്റെ അതേ സാന്ദ്രത ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നുവെന്നും H2S ന്റെ ഫിസിയോളജിക്കൽ പരിധി 10 മുതൽ 100 ​​μM വരെയാണെന്നും ചില എഴുത്തുകാർ ചൂണ്ടിക്കാട്ടി, അതിനാൽ ഈ അളവ് ഫിസിയോളജിക്കൽ പരിധിക്കുള്ളിലാണ്15,16. മറ്റുള്ളവർ 30 μM NaHS ന് പ്ലാസ്മ H2S ലെവൽ ഫിസിയോളജിക്കൽ പരിധിക്കുള്ളിൽ നിലനിർത്താൻ കഴിയുമെന്ന് വിശദീകരിച്ചു, അതായത് 5–300 μM19,20. H2S ന്റെ ഫലങ്ങൾ പഠിക്കാൻ ചില പഠനങ്ങളിൽ ഉപയോഗിച്ച 30 μM (pH = 7.0, T = 20 °C) എന്ന ജലത്തിലെ NaHS ന്റെ സാന്ദ്രത ഞങ്ങൾ പരിഗണിക്കുന്നു. ലയിച്ച H2S വാതകത്തിന്റെ സാന്ദ്രത 14.7 μM ആണെന്ന് നമുക്ക് കണക്കാക്കാം, ഇത് പ്രാരംഭ NaHS സാന്ദ്രതയുടെ ഏകദേശം 50% ആണ്. ഈ മൂല്യം മറ്റ് രചയിതാക്കൾ ഇതേ സാഹചര്യങ്ങളിൽ കണക്കാക്കിയ മൂല്യത്തിന് സമാനമാണ്13,48.
ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിൽ, NaHS അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ ശരീരഭാരത്തിൽ മാറ്റം വരുത്തിയില്ല; ഈ ഫലം ആൺ എലികളിലും 22,23 ആൺ എലികളിലും നടത്തിയ മറ്റ് പഠനങ്ങളുടെ ഫലങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു18; എന്നിരുന്നാലും, നെഫ്രെക്റ്റോമൈസ് ചെയ്ത എലികളിൽ NaSH ശരീരഭാരം കുറച്ചതായി രണ്ട് പഠനങ്ങൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു24,26, അതേസമയം മറ്റ് പഠനങ്ങൾ ശരീരഭാരത്തിൽ NaSH അഡ്മിനിസ്ട്രേഷന്റെ പ്രഭാവം റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടില്ല15,16,17,19,20,21,25. കൂടാതെ, ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിൽ, NaSH അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ സെറം യൂറിയയെയും ക്രിയേറ്റിൻ ക്രോമിയം അളവുകളെയും ബാധിച്ചില്ല, ഇത് മറ്റൊരു റിപ്പോർട്ടിന്റെ ഫലങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു25.
കുടിവെള്ളത്തിൽ രണ്ടാഴ്ചത്തേക്ക് NaHS ചേർക്കുന്നത് ആൺ, പെൺ എലികളിലെ മൊത്തം സെറം സൾഫൈഡ് സാന്ദ്രതയെ ബാധിക്കുന്നില്ലെന്ന് പഠനം കണ്ടെത്തി. സെൻ തുടങ്ങിയവരുടെ (16) ഫലങ്ങളുമായി ഈ കണ്ടെത്തൽ പൊരുത്തപ്പെടുന്നു: കുടിവെള്ളത്തിൽ 30 μM NaHS ഉപയോഗിച്ച് 8 ആഴ്ച ചികിത്സിച്ചത് നിയന്ത്രണ എലികളിലെ പ്ലാസ്മ സൾഫൈഡ് അളവിനെ ബാധിച്ചില്ല; എന്നിരുന്നാലും, ഈ ഇടപെടൽ നെഫ്രെക്റ്റോമൈസ് ചെയ്ത എലികളുടെ പ്ലാസ്മയിലെ കുറഞ്ഞ H2S അളവ് പുനഃസ്ഥാപിച്ചതായി അവർ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു. 5 മാസത്തേക്ക് കുടിവെള്ളത്തിൽ 30 μM NaHS ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചത് പ്രായമായ എലികളിൽ പ്ലാസ്മ രഹിത സൾഫൈഡ് അളവ് ഏകദേശം 26% വർദ്ധിപ്പിച്ചതായും ലി തുടങ്ങിയവരുടെ (22) റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു. കുടിവെള്ളത്തിൽ NaHS ചേർത്തതിനുശേഷം സൾഫൈഡ് രക്തചംക്രമണത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ മറ്റ് പഠനങ്ങൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടില്ല.
സിഗ്മ NaHS ഉപയോഗിച്ചുള്ള ഏഴ് പഠനങ്ങൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടു, എന്നാൽ ജലാംശം നൽകുന്ന വെള്ളത്തെക്കുറിച്ച് കൂടുതൽ വിശദാംശങ്ങൾ നൽകിയില്ല, കൂടാതെ അഞ്ച് പഠനങ്ങൾ അവയുടെ തയ്യാറെടുപ്പ് രീതികളിൽ ഉപയോഗിച്ച NaHS ന്റെ ഉറവിടം പരാമർശിച്ചില്ല17,18,24,25,26. NaHS ഒരു ജലാംശം ഉള്ള തന്മാത്രയാണ്, അതിലെ ജലാംശം ഉള്ള വെള്ളം വ്യത്യാസപ്പെടാം, ഇത് ഒരു നിശ്ചിത മോളാരിറ്റിയുടെ ലായനി തയ്യാറാക്കാൻ ആവശ്യമായ NaHS ന്റെ അളവിനെ ബാധിക്കുന്നു. ഉദാഹരണത്തിന്, ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിലെ NaHS ഉള്ളടക്കം NaHS•1.3 H2O ആയിരുന്നു. അതിനാൽ, ഈ പഠനങ്ങളിലെ യഥാർത്ഥ NaHS സാന്ദ്രത റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തതിനേക്കാൾ കുറവായിരിക്കാം.
"ഇത്രയും ഹ്രസ്വകാല സംയുക്തത്തിന് ഇത്രയും നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന പ്രഭാവം എങ്ങനെ ഉണ്ടാകും?" എലികളിലെ വൻകുടലിൽ NaHS ന്റെ ഫലങ്ങൾ വിലയിരുത്തുമ്പോൾ Pozgay et al.21 ഈ ചോദ്യം ചോദിച്ചു. ഭാവിയിലെ പഠനങ്ങൾക്ക് ഈ ചോദ്യത്തിന് ഉത്തരം നൽകാൻ കഴിയുമെന്ന് അവർ പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു, കൂടാതെ NaHS ലായനികളിൽ H2S, NaHS21 ന്റെ ഫലത്തിന് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്ന ഡൈസൾഫൈഡുകൾ എന്നിവയ്ക്ക് പുറമേ കൂടുതൽ സ്ഥിരതയുള്ള പോളിസൾഫൈഡുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കാമെന്ന് അവർ അനുമാനിക്കുന്നു. മറ്റൊരു സാധ്യത, ലായനിയിൽ അവശേഷിക്കുന്ന NaHS ന്റെ വളരെ കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയും ഗുണകരമായ ഫലമുണ്ടാക്കുമെന്നതാണ്. വാസ്തവത്തിൽ, രക്തത്തിലെ H2S ന്റെ മൈക്രോമോളാർ അളവ് ഫിസിയോളജിക്കൽ അല്ലെന്നും നാനോമോളാർ ശ്രേണിയിലായിരിക്കണമെന്നും അല്ലെങ്കിൽ പൂർണ്ണമായും ഇല്ലാതാകണമെന്നും ഓൾസൺ et al. തെളിവ് നൽകി. പ്രോട്ടീൻ സൾഫേഷൻ വഴി H2S പ്രവർത്തിച്ചേക്കാം, ഇത് പല പ്രോട്ടീനുകളുടെയും പ്രവർത്തനം, സ്ഥിരത, പ്രാദേശികവൽക്കരണം എന്നിവയെ ബാധിക്കുന്ന ഒരു റിവേഴ്‌സിബിൾ പോസ്റ്റ്-ട്രാൻസ്ലേഷണൽ മോഡിഫിക്കേഷനാണ്52,53,54. വാസ്തവത്തിൽ, ഫിസിയോളജിക്കൽ സാഹചര്യങ്ങളിൽ, പല കരൾ പ്രോട്ടീനുകളുടെയും ഏകദേശം 10% മുതൽ 25% വരെ സൾഫൈലേറ്റഡ്53 ആണ്. രണ്ട് പഠനങ്ങളും NaHS ന്റെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള നാശത്തെ അംഗീകരിക്കുന്നു19,23 എന്നാൽ അതിശയകരമെന്നു പറയട്ടെ, "കുടിവെള്ളം ദിവസവും മാറ്റിസ്ഥാപിച്ചുകൊണ്ട് അതിൽ NaHS ന്റെ സാന്ദ്രത ഞങ്ങൾ നിയന്ത്രിച്ചു".23 ഒരു പഠനം ആകസ്മികമായി "NaHS ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് H2S ദാതാവാണെന്നും H2S തന്നെ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കാൻ ക്ലിനിക്കൽ പ്രാക്ടീസിൽ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്നു" എന്നും പ്രസ്താവിച്ചു.18
മുകളിൽ കൊടുത്തിരിക്കുന്ന ചർച്ചയിൽ, ലായനിയിൽ നിന്ന് NaHS ബാഷ്പീകരണം, ഓക്സീകരണം, ഫോട്ടോലൈസിസ് എന്നിവയിലൂടെ നഷ്ടപ്പെടുന്നതിനാൽ, ലായനിയിൽ നിന്ന് H2S നഷ്ടപ്പെടുന്നത് കുറയ്ക്കുന്നതിന് ചില നിർദ്ദേശങ്ങൾ നൽകിയിട്ടുണ്ട്. ഒന്നാമതായി, H2S ന്റെ ബാഷ്പീകരണം വാതക-ദ്രാവക ഇന്റർഫേസിനെയും ലായനിയുടെ pH നെയും ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു13; അതിനാൽ, ബാഷ്പീകരണ നഷ്ടം കുറയ്ക്കുന്നതിന്, മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ വാട്ടർ ബോട്ടിലിന്റെ കഴുത്ത് കഴിയുന്നത്ര ചെറുതാക്കാം15,19, കൂടാതെ ബാഷ്പീകരണ നഷ്ടം കുറയ്ക്കുന്നതിന് വെള്ളത്തിന്റെ pH സ്വീകാര്യമായ ഉയർന്ന പരിധിയിലേക്ക് (അതായത്, 6.5–8.551) ക്രമീകരിക്കാം11. രണ്ടാമതായി, ഓക്സിജന്റെയും കുടിവെള്ളത്തിലെ സംക്രമണ ലോഹ അയോണുകളുടെയും സാന്നിധ്യം മൂലമാണ് H2S ന്റെ സ്വയമേവയുള്ള ഓക്സീകരണം സംഭവിക്കുന്നത്13, അതിനാൽ ആർഗോൺ അല്ലെങ്കിൽ നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് കുടിവെള്ളത്തിന്റെ ഡീഓക്സിജനേഷൻ44,45, ലോഹ ചേലേറ്ററുകളുടെ ഉപയോഗം37,47 എന്നിവ സൾഫൈഡുകളുടെ ഓക്സീകരണം കുറയ്ക്കാൻ സഹായിക്കും. മൂന്നാമതായി, H2S ന്റെ ഫോട്ടോഡീകോമ്പോസിഷൻ തടയാൻ, വാട്ടർ ബോട്ടിലുകൾ അലുമിനിയം ഫോയിൽ കൊണ്ട് പൊതിയാം; സ്ട്രെപ്റ്റോസോടോസിൻ പോലുള്ള പ്രകാശ സംവേദനക്ഷമതയുള്ള വസ്തുക്കൾക്കും ഈ രീതി ബാധകമാണ്. അവസാനമായി, അജൈവ സൾഫൈഡ് ലവണങ്ങൾ (NaHS, Na2S, CaS) കുടിവെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുന്നതിനുപകരം ഗാവേജ് വഴി നൽകാം. മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തതുപോലെ56,57,58; എലികളിൽ ഗാവേജ് വഴി നൽകുന്ന റേഡിയോ ആക്ടീവ് സോഡിയം സൾഫൈഡ് നന്നായി ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുകയും മിക്കവാറും എല്ലാ ടിഷ്യൂകളിലേക്കും വിതരണം ചെയ്യപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്59. ഇന്നുവരെ, മിക്ക പഠനങ്ങളും അജൈവ സൾഫൈഡ് ലവണങ്ങൾ ഇൻട്രാപെരിറ്റോണിയലായി നൽകിയിട്ടുണ്ട്; എന്നിരുന്നാലും, ക്ലിനിക്കൽ ക്രമീകരണങ്ങളിൽ ഈ വഴി വളരെ അപൂർവമായി മാത്രമേ ഉപയോഗിക്കുന്നുള്ളൂ60. മറുവശത്ത്, മനുഷ്യരിൽ ഏറ്റവും സാധാരണവും ഇഷ്ടപ്പെടുന്നതുമായ മാർഗ്ഗമാണ് ഓറൽ റൂട്ട്61. അതിനാൽ, എലികളിൽ H2S ദാതാക്കളുടെ ഫലങ്ങൾ ഓറൽ ഗാവേജ് വഴി വിലയിരുത്താൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
ജലീയ ലായനിയിലും സെറമിലും MB രീതി ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ സൾഫൈഡ് അളന്നു എന്നതാണ് ഒരു പരിമിതി. സൾഫൈഡ് അളക്കുന്നതിനുള്ള രീതികളിൽ അയോഡിൻ ടൈറ്ററേഷൻ, സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രി, ഇലക്ട്രോകെമിക്കൽ രീതി (പൊട്ടൻഷ്യോമെട്രി, ആമ്പറോമെട്രി, കൂലോമെട്രിക് രീതി, ആമ്പറോമെട്രിക് രീതി), ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി (ഗ്യാസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി, ഹൈ-പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി) എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു, അവയിൽ ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതി MB സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിക് രീതിയാണ്62. ജൈവ സാമ്പിളുകളിൽ H2S അളക്കുന്നതിനുള്ള MB രീതിയുടെ ഒരു പരിമിതി, അത് എല്ലാ സൾഫർ അടങ്ങിയ സംയുക്തങ്ങളെയും സ്വതന്ത്ര H2S63 അല്ല അളക്കുന്നു എന്നതാണ്, കാരണം ഇത് അസിഡിക് സാഹചര്യങ്ങളിൽ നടത്തുന്നു, ഇത് ജൈവ സ്രോതസ്സിൽ നിന്ന് സൾഫർ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിലേക്ക് നയിക്കുന്നു64. എന്നിരുന്നാലും, അമേരിക്കൻ പബ്ലിക് ഹെൽത്ത് അസോസിയേഷന്റെ അഭിപ്രായത്തിൽ, വെള്ളത്തിൽ സൾഫൈഡ് അളക്കുന്നതിനുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതി MB ആണ്65. അതിനാൽ, NaHS അടങ്ങിയ ലായനികളുടെ അസ്ഥിരതയെക്കുറിച്ചുള്ള ഞങ്ങളുടെ പ്രധാന ഫലങ്ങളെ ഈ പരിമിതി ബാധിക്കില്ല. കൂടാതെ, ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിൽ, ജലത്തിലും NaHS അടങ്ങിയ സെറം സാമ്പിളുകളിലും സൾഫൈഡ് അളവുകളുടെ വീണ്ടെടുക്കൽ യഥാക്രമം 91% ഉം 93% ഉം ആയിരുന്നു. ഈ മൂല്യങ്ങൾ മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്ത ശ്രേണികളുമായി (77–92)66 യോജിക്കുന്നു, ഇത് സ്വീകാര്യമായ വിശകലന കൃത്യതയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു42. പ്രീക്ലിനിക്കൽ പഠനങ്ങളിൽ പുരുഷന്മാർ മാത്രമുള്ള മൃഗ പഠനങ്ങളെ അമിതമായി ആശ്രയിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കാൻ നാഷണൽ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് ഓഫ് ഹെൽത്ത് (NIH) മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി ഞങ്ങൾ ആൺ, പെൺ എലികളെ ഉപയോഗിച്ചുവെന്നത് ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്67 സാധ്യമാകുമ്പോഴെല്ലാം ആൺ, പെൺ എലികളെയും ഉൾപ്പെടുത്തുക68. ഈ പോയിന്റ് മറ്റുള്ളവർ ഊന്നിപ്പറഞ്ഞിട്ടുണ്ട്69,70,71.
ഉപസംഹാരമായി, ഈ പഠനത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് കുടിവെള്ളത്തിൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കിയ NaHS ലായനികൾ അവയുടെ അസ്ഥിരത കാരണം H2S ഉത്പാദിപ്പിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കാൻ കഴിയില്ല എന്നാണ്. ഈ രീതിയിലുള്ള അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ മൃഗങ്ങളെ അസ്ഥിരവും പ്രതീക്ഷിച്ചതിലും കുറഞ്ഞതുമായ NaHS ലെവലുകൾക്ക് വിധേയമാക്കും; അതിനാൽ, കണ്ടെത്തലുകൾ മനുഷ്യർക്ക് ബാധകമായേക്കില്ല.
നിലവിലെ പഠനത്തിൽ ഉപയോഗിച്ചതും/അല്ലെങ്കിൽ വിശകലനം ചെയ്തതുമായ ഡാറ്റാസെറ്റുകൾ ന്യായമായ അഭ്യർത്ഥന പ്രകാരം ബന്ധപ്പെട്ട രചയിതാവിൽ നിന്ന് ലഭ്യമാണ്.
സാബോ, കെ. ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് (H2S) ഗവേഷണത്തിന്റെ സമയരേഖ: പരിസ്ഥിതി വിഷവസ്തുവിൽ നിന്ന് ജൈവ മധ്യസ്ഥനിലേക്ക്. ബയോകെമിസ്ട്രിയും ഫാർമക്കോളജിയും 149, 5–19. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2017.09.010 (2018).
അബെ, കെ., കിമുറ, എച്ച്. ഒരു എൻഡോജെനസ് ന്യൂറോമോഡുലേറ്ററായി ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന്റെ സാധ്യമായ പങ്ക്. ജേണൽ ഓഫ് ന്യൂറോസയൻസ്, 16, 1066–1071. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.16-03-01066.1996 (1996).
ചിറിനോ, ജി., സാബോ, സി., പാപ്പാപെട്രോപൗലോസ്, എ. സസ്തനികളുടെ കോശങ്ങൾ, കലകൾ, അവയവങ്ങൾ എന്നിവയിൽ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന്റെ ഫിസിയോളജിക്കൽ പങ്ക്. ഫിസിയോളജി ആൻഡ് മോളിക്യുലാർ ബയോളജി 103, 31–276 ലെ അവലോകനങ്ങൾ. https://doi.org/10.1152/physrev.00028.2021 (2023).
ഡില്ലൺ, കെ.എം., കാരാസോൺ, ആർ.ജെ., മാറ്റ്സൺ, ജെ.ബി., കാഷ്ഫി, കെ. നൈട്രിക് ഓക്സൈഡിനും ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിനും വേണ്ടിയുള്ള സെല്ലുലാർ ഡെലിവറി സിസ്റ്റങ്ങളുടെ പരിണാമ വാഗ്ദാനം: വ്യക്തിഗതമാക്കിയ വൈദ്യശാസ്ത്രത്തിന്റെ ഒരു പുതിയ യുഗം. ബയോകെമിസ്ട്രിയും ഫാർമക്കോളജിയും 176, 113931. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2020.113931 (2020).
സൺ, എക്സ്., തുടങ്ങിയവർ. സ്ലോ-റിലീസ് ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് ദാതാവിന്റെ ദീർഘകാല ഉപയോഗം മയോകാർഡിയൽ ഇസ്കെമിയ/റീപ്പർഫ്യൂഷൻ പരിക്ക് തടയാൻ സഹായിക്കും. ശാസ്ത്രീയ റിപ്പോർട്ടുകൾ 7, 3541. https://doi.org/10.1038/s41598-017-03941-0 (2017).
സിറ്റ്ഡിക്കോവ, ജിഎഫ്, ഫ്യൂച്ച്സ്, ആർ., കൈൻസ്, ഡബ്ല്യു., വെയ്ഗർ, ടിഎം, ഹെർമൻ, എ. ബികെ ചാനൽ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് (H2S) സംവേദനക്ഷമതയെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. ഫ്രോണ്ടിയേഴ്‌സ് ഇൻ ഫിസിയോളജി 5, 431. https://doi.org/10.3389/fphys.2014.00431 (2014).
സിറ്റ്ഡിക്കോവ, ജിഎഫ്, വെയ്‌ഗർ, ടിഎം, ഹെർമൻ, എ. ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് എലി പിറ്റ്യൂട്ടറി ട്യൂമർ കോശങ്ങളിൽ കാൽസ്യം-ആക്ടിവേറ്റഡ് പൊട്ടാസ്യം (ബികെ) ചാനൽ പ്രവർത്തനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. ആർക്കിറ്റ്. പ്ലൂഗേഴ്‌സ്. 459, 389–397. https://doi.org/10.1007/s00424-009-0737-0 (2010).
ജെഡ്ഡി, എസ്., തുടങ്ങിയവർ. ടൈപ്പ് 2 പ്രമേഹ എലികളിൽ മയോകാർഡിയൽ ഇസ്കെമിയ-റിപ്പർഫ്യൂഷൻ പരിക്കിനെതിരെ നൈട്രൈറ്റിന്റെ സംരക്ഷണ പ്രഭാവം ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. നൈട്രിക് ഓക്സൈഡ് 124, 15–23. https://doi.org/10.1016/j.niox.2022.04.004 (2022).
കോർവിനോ, എ., തുടങ്ങിയവർ. H2S ദാതാക്കളുടെ രസതന്ത്രത്തിലെ പ്രവണതകളും ഹൃദയ സംബന്ധമായ രോഗങ്ങളിൽ അതിന്റെ സ്വാധീനവും. ആന്റിഓക്‌സിഡന്റുകൾ 10, 429. https://doi.org/10.3390/antiox10030429 (2021).
ഡിലിയോൺ, ഇ.ആർ., സ്റ്റോയ്, ജി.എഫ്., ഓൾസൺ, കെ.ആർ. (2012). ജൈവ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന്റെ നിഷ്ക്രിയ നഷ്ടങ്ങൾ. അനലിറ്റിക്കൽ ബയോകെമിസ്ട്രി 421, 203–207. https://doi.org/10.1016/j.ab.2011.10.016 (2012).
നാഗി, പി., തുടങ്ങിയവർ. ഫിസിയോളജിക്കൽ സാമ്പിളുകളിലെ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡ് അളവുകളുടെ രാസ വശങ്ങൾ. ബയോകെമിക്ക എറ്റ് ബയോഫിസിക്കൽ ആക്റ്റ 1840, 876–891. https://doi.org/10.1016/j.bbagen.2013.05.037 (2014).
ക്ലൈൻ, എൽഎൽ.ഡി. പ്രകൃതിദത്ത ജലത്തിലെ ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന്റെ സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിക് നിർണ്ണയം. ലിംനോൾ. ഓഷ്യാനോഗ്രർ. 14, 454–458. https://doi.org/10.4319/lo.1969.14.3.0454 (1969).
ഓൾസൺ, കെ.ആർ (2012). ഹൈഡ്രജൻ സൾഫൈഡിന്റെ രസതന്ത്രത്തിലും ജീവശാസ്ത്രത്തിലും പ്രായോഗിക പരിശീലനം. "ആന്റിഓക്‌സിഡന്റുകൾ." റെഡോക്സ് സിഗ്നലിംഗ്. 17, 32–44. https://doi.org/10.1089/ars.2011.4401 (2012).